利用scrna-seq，我们可以更精确地定义细胞的亚型，追踪它们的发育谱系，确定克隆型和表现型之间的关系，绘制不同细胞之间的相互作用和空间关系图，从而从多个维度描述tme。此外，还需要通过一系列体内和体外实验来验证结果。我们总结了使用scrna-seq研究的最新出版物

    b细胞受体(bcellreceptor，bcr)是一种能识别并结合特异性抗原的膜免疫球蛋白，在b细胞的分化成熟过程中起着重要作用。bcr由两条重链和两条轻链组成，其中可变(v)、多样性(d)和连接(j)基因序列的重组创造了b细胞的多样性。这种多基因的复杂性使得鉴别不同的受体变得困难。然而，由于每个b细胞通常表达一个单一的受体，潜在的抗原特异性受体可以通过给定的原细胞链发现。bcr的两个主要功能如下。首先，它通过诱导b细胞激活过程中肌动蛋白骨架的实质改变和各种基因的表达来激活b细胞。其次，它介导抗原的鉴定和提取，从而导致加工过的肽在主要组织相容性复合体ii(mhcii)上呈现给t辅助细胞。因此，bcr测序有助于进一步了解b细胞分化的轨迹及其特异性识别抗原性的机制，特别是当与单个b细胞的完整转录组身份配对时，这为了解癌症的发展提供了线索。更重要的是，bcr测序可以追踪来自单细胞的群体，揭示克隆型和表型之间的关系。scrna-seq技术在bcr测序中具有天然优势，因为含有umi的微流控系统可以保证同源vh-vl配对的保存，而这些同源vh-vl配对在b细胞批量测序中可能会丢失。basic是一个在单细胞分辨率上进行bcr测序的平台。作为重建配对全长bcr序列的工具，bracer为b细胞的克隆推断和谱系追踪提供了一个完整的管道。libra-seq是一种高通量的方法，将bcrse-序列与其同源抗原特异性连接起来，可以用来绘制特定对象中数千个b细胞的抗原特异性。

    研究免疫球蛋白以探讨体液免疫的复杂性

    免疫球蛋白存在于肿瘤和血清中，在肿瘤中起双重作用。抗体通过其片段可结晶(fc)支配功能，并受翻译后修饰调控。通常，免疫球蛋白是由骨髓和脾脏的浆细胞(pcs)分泌的。组织炎症区域和肿瘤内部的pc，特别是在三级淋巴结构(tls)中，分泌肿瘤相关抗体并直接在肿瘤上诱导原位效应。在抗肿瘤功能方面，igg是最重要的一类人免疫球蛋白，因为它能够结合巨噬细胞和自然杀伤细胞上的fcγ受体，并促进adcc、adcp和cdc的作用。此外，igg对抗原处理和呈递至关重要，因为抗原呈递细胞(apcs)上的fcγ受体可以与igg包被的免疫复合物结合，激活t细胞。抗体和抗体分泌细胞(apcs)的单细胞测序有助于进一步明确b细胞体液免疫的复杂网络。已经报道了一种单细胞液滴微流控测序方案，用于特异性结合靶细胞的抗体，这也适用于初级人类pc。celligo是一种液滴微流体系统，用于高通量单细胞筛选分泌igg的原代细胞，一方面，通过基于荧光的液滴内单细胞生物测定检测igg活性，另一方面，用barcoded反转录对配对的v基因进行测序。

    外周血未成熟b细胞通过高内皮静脉进入b淋巴滤泡。在b细胞滤泡中，na?veb细胞(cd27)通过固有apc(包括dcs和滤泡树突状细胞(fdcs))接触抗原，之后激活bcr信号诱导抗原提取、内化和加工，将肽呈现在mhcii上。然后，b细胞迁移到与t细胞相邻的滤泡区边缘，将抗原呈递给滤泡辅助t(tfh)细胞。因此，tfh细胞刺激bcr，诱导na?veb细胞分化，主要包括记忆b细胞(mbcs)、短命b细胞(short-livedpcs)和生发中心(germinalcenter，gc)b细胞。这些不依赖gc的mbcs表达rgs13，可能增加gc抗性。此外，它们缺乏b细胞进入和离开gcs的ccr7和gpr183。为了分化为gcb细胞，它们首先进入gc的暗区(darkzone，dz)，在那里它们的膜表面免疫球蛋白通过体细胞高突变(somatichypermutation，shm)发生变化，称为亲和成熟。接下来，它们在亮区(lz)经历一个竞争过程，在那里许多b细胞聚集，它们的命运取决于它们与tfh细胞的相互作用，可能有能力捕获和呈现抗原，并发生类转换重组(csr)。这个过程也依赖于tfh细胞分化的结果，导致b细胞的结果。低亲和性b细胞成为长寿命mbcs，高亲和性b细胞成为pcs，其他细胞凋亡或重新进入****z进行shm和克隆扩增。最近的研究表明，cmyc+lzb细胞亚群包括亲和力较高的pc前体或未来的dz进入者，以及一些亲和力较低的mbc前体。值得注意的是，bcr在这个过程中起主要作用，b细胞分化的体液免疫过程中两个重要的检查点是na?veb细胞和gcb细胞上的抗原提呈，这可能会提高体液免疫应答。此外，在单细胞水平上的完整转录组字符